中国医科大学学报

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中国医科大学学报 ›› 2016, Vol. 45 ›› Issue (10): 883–886.doi: 10.12007/j.issn.0258-4646.2016.10.004

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靶向 REST 基因 TALEN 质粒的快速构建与活性检测

张殿宝 1,赵峰 1,张涛 1,林学文 1,王瑞 1,施萍 2,庞希宁 13   

  1. 中国医科大学 1 基础医学院干细胞与再生医学研究室,沈阳 110122;2 第一临床学院全科医学教研室,沈阳 110001;3 科学实验中 心,沈阳 110122
  • 收稿日期:2016-04-05 出版日期:2016-10-30 发布日期:2016-10-11
  • 通讯作者: 庞希宁 E-mail:pangxining@126.com
  • 作者简介:张殿宝(1986 -),男,讲师,博士 .
  • 基金资助:
    国家重点基础研究发展计划(2012CB518103);沈阳市干 细胞与再生医学重点实验室(F15?157?1?00);沈阳市科 学技术计划(F14?201?4?00)

Fast Construction and Activity Detection of TALEN Plasmids for REST Gene Knockout

ZHANG Dianbao1,ZHAO Feng1,ZHANG Tao1,LIN Xuewen1,WANG Rui1,SHI Ping2,PANG Xining13   

  1. 1 Department of Stem Cells and Regenerative Medicine,College of Basic Medical Science,China Medical University,Shenyang 110122,China;2 Department of General Practice,The First Clinical College,China Medical University,Shenyang 110001,China;3 Science Experiment Center,China Medical University,Shenyang 110122,China
  • Received:2016-04-05 Online:2016-10-30 Published:2016-10-11

摘要: 目的 针对人 REST 基因设计并构建特异性类转录激活因子效应物核酸酶(TALEN)质粒,快速获得具有较高突变效率 的 TALEN。方法 根据 REST 的序 列 信 息 设 计 TALEN 靶 位 ,使 用 单 元 组 装 的 方 法 快 速 构 建 TALEN 质 粒 ,在 293T 细 胞 中 进 行 活 性 检 测 并 计 算 突 变 效 率 。 结果 针对 REST 设计并成功构建 5 个 TALEN 质粒,组成 6 对 TALEN 并实现基因打靶,其 中 L1 和 R3 组合的突变效率达到 60.9%。结论 成功获得了靶向人 REST 基因的高效 TALEN,为进一步研究 REST 的基因功能 及其在相关疾病中的作用奠定基础。

关键词: REST, 类转录激活因子效应物核酸酶, 质粒构建, 活性检测

Abstract: Objective To design and construct TALEN plasmids for human REST gene knockout. Methods The target sites of TALEN were designed according to the transcripts of REST,and the recombinant plasmids were constructed by unit assembly method. The mutagenic activities of TALENs were determined in 293T cells. Results Five TALEN plasmids were constructed,and REST gene targeting was achieved by 6 pairs of TALENs. The mutation efficiency of the combination of L1 and R3 was 60.9%. Conclusion Effective TALEN for human REST knockout was constructed,which can benefit to the gene function study of REST in related diseases.

Key words: REST, TALEN, vector construction, activity detection

中图分类号: 

  • Q783
[1] 刘彩红,王利利,冯艳玲,朱亚勤. h-arrestin1重组蛋白不同亚型筛选及互作鉴定[J]. 中国医科大学学报, 2012, 41(1): 24-27.
[2] 蔡鑫泽, 顾卉, 刘彤, 李丰. hLMO1编码基因重组质粒的构建及蛋白的表达和定位[J]. 中国医科大学学报, 2009, 38(11): 816-.
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