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中国医科大学学报 ›› 2017, Vol. 46 ›› Issue (5): 397-400.doi: 10.12007/j.issn.0258-4646.2017.05.004

• 论著 • 上一篇    下一篇

心肌 Cav1.2 钙通道 NT 片段的提取纯化及其与 CaM 的相互作用

苏敬阳,邵冬雪,雷明,康泽,赵君,方涵田,郭凤,赵美眯,郝丽英,封瑞   

  1. 中国医科大学药学院药物毒理学教研室,沈阳 110122
  • 收稿日期:2016-11-10 出版日期:2017-05-30 发布日期:2017-05-18
  • 通讯作者: 封瑞 E-mail:fengrui527@163.com
  • 作者简介:苏敬阳(1992 -),女,硕士研究生 .
  • 基金资助:
    国家自然科学基金(31400981,31471091);大学生创新计划项目(2015069,201510159068,201510159047,201610159000064)

Expression and Purification of an N-terminal Fragment of the Cav1.2 Calcium Channel and Characterization of Its Interaction with Calmodulin

SU Jingyang,SHAO Dongxue,LEI Ming,KANG Ze,ZHAO Jun,FANG Hantian,GUO Feng,ZHAO Meimi,HAO Liying,FENG Rui   

  1. Department of Pharmaceutical Toxicology,School of Pharmacy,China Medical University,Shenyang 110122,China
  • Received:2016-11-10 Online:2017-05-30 Published:2017-05-18

摘要: 目的 探讨心肌 Cav1.2 钙通道 NT 蛋白片段提取与纯化的方法,并研究其与 CaM 的相互作用。方法 将 NT 的 cDNA 插 入 pGEX-6p-3 质粒载体后,转化大肠杆菌 BL-21 感受态细胞,大量培养并利用异丙基硫代-β-D 半乳糖苷(IPTG)诱导 NT 的 GST 融合蛋白表达,GS-4B beads 分离纯化,PreScission 蛋白酶切除 GST 标签,进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDS- PAGE)检测蛋白纯度和相对分子质量。采用 GST pull-down 实验研究 NT 片段与 CaM 的相互作用。结果 SDS-PAGE 结果显示 成功纯化获得 NT 蛋白片段,且具有较高的纯度。GST pull-down 实验结果显示 NT 可与 CaM 结合,且具有浓度依赖性。结论 本研究成功制备与纯化了心肌 Cav1.2 钙通道 NT 蛋白片段,为深入研究蛋白相互作用及 NT 的生物学功能奠定了基础。

关键词: NT, 提取, 纯化, CaM, GST pull-down 实验

Abstract: Objective To investigate a method for the purification of the N-terminal peptide fragment(NT)of the myocardial calcium channel Cav1.2,and characterize its interaction with calmodulin(CaM). Methods Escherichia coli BL-21 cells were transformed with plasmid pGEX-6p-3/NT harboring the NT-GST fusion gene. The cells harboring pGEX-6p-3/NT were cultured and protein expression was induced with isopropyl-β-D- thiogalactoside(IPTG). Then,the GST-NT fusion protein was purified by using glutathione Sepharose 4B(GS-4B)beads. GST was cleaved off with the PreScission protease,and SDS-PAGE was performed to detect the purity and relative molecular weight of the purified peptide. Further, GST pull-down assay was performed to characterize the interaction of the NT peptide with CaM. Results SDS-PAGE analysis showed that the NT peptide was successfully purified,with high purity. Results of the GST pull-down assay showed that the NT peptide could interact with CaM. Conclusion This study establishes a method for the purification of the NT peptide and lays the foundation for further research on the interaction partners and biological functions of NT.

Key words: NT, extraction, purification, CaM, GST pull-down assay

中图分类号: 

  • R96
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