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中国医科大学学报 ›› 2017, Vol. 46 ›› Issue (6): 489-494.doi: 10.12007/j.issn.0258-4646.2017.06.003

• 论著 • 上一篇    下一篇

人巨细胞病毒 Han 株 US12 基因缺失株的构建及其在人胚肺 成纤维细胞中的复制

卢颖 1,2,马艳萍 1,柳中洋 1,王鸿雁 1,齐莹 1,韩丽英 1,高爽 3,郑博 4,刘畅 1,黄郁晶 1,阮强 1   

  1. 1 中国医科大学附属盛京医院病毒研究室,沈阳 110004;2 锦州医科大学基础医学院病原生物学教研室,辽宁 锦州 121000;3 沈阳 市妇婴医院临床实验室,沈阳 110014;4 沈阳市妇婴医院儿科,沈阳 110014
  • 收稿日期:2016-09-13 出版日期:2017-06-30 发布日期:2017-06-07
  • 通讯作者: 阮强 E-mail:ruanq@sj?hospital.org
  • 作者简介:卢颖(1971 -),女,副教授,博士 .
  • 基金资助:
    国家自然科学基金(30672248,81371788);盛京医院自由研究者项目

Construction of Human Cytomegalovirus Han-ΔUS12-BAC Strain and Studies on Its Replication in Human Embryonic Lung Fibroblasts

LU Ying1,2,MA Yanping1,LIU Zhongyang1,WANG Hongyan1,QI Ying1,HAN Liying1,GAO Shuang3,ZHENG Bo4,LIU Chang1,HUANG Yujing1,RUAN Qiang1   

  1. 1 Virus Laboratory,Shengjing Hospital,China Medical University,Shenyang 110004,China;2 Department of Pathogen Biology,College of Basic Medical Sciences,Jinzhou Medical University,Jinzhou 121000,China;3 The Clinical Laboratory,Shenyang Women’s and Children’s Hospital,Shenyang 110014,China;4 The Pediatric Department,Shenyang Women’s and Children’s Hospital,Shenyang 110014,China
  • Received:2016-09-13 Online:2017-06-30 Published:2017-06-07

摘要: 目的 构建人巨细胞病毒(HCMV)Han 株 US12 基因缺失的 BAC 毒株,研究 US12 产物对 HCMV Han 株在人胚肺成纤维 细胞(HELF)中复制的影响。方法 以侧翼含有 US12 基因同源序列的 PCR 引物扩增卡那霉素抗性基因,电转至含有 Han 株 BAC 质粒的大肠杆菌 DY380-Han-wt-BAC,PCR 及 DNA 测序验证 US12 缺失的病毒序列。将缺失突变质粒 Han-ΔUS12-BAC-P 电 转 至 HELF,获得感染性病毒颗粒 Han-ΔUS12-BAC。 以 MOI 为 0.1 的 Han-ΔUS12-BAC 毒株及 Han-wt- BAC 毒株感染 HELF, TCID50 法测定上清中病毒滴度,绘制病毒增殖曲线。结果 成功构建了 Han-ΔUS12-BAC 克隆,转染 HELF 后成功获得感染性 病毒。生长曲线实验结果表明,ΔUS12 缺失和野生型毒株在 HELF 中复制增殖与扩散水平无明显差异。结论 US12 为 HCMV 临床株 Han 在 HELF 中增殖和扩散过程中的非必需基因。

关键词: 巨细胞病毒, US12, 细菌人工染色体, 生长曲线

Abstract: Objective To construct human cytomegalovirus(HCMV)Han-ΔUS12-BAC strain and to study the role of US12 in HCMV replication in human embryonic lung fibroblasts(HELF). Methods Kanamycin-resistant gene was amplified with primers containing homology arms sequence flanking US12 and then electroporated into E.coli DY380 - Han - wt - BAC competent cells. Successfully recombinant Han - ΔUS12 - BAC clones were identified by PCR,sequenced for confirmation Han- ΔUS12-BAC plasmids were electroporated into HELF to produce infectious virions. Han-ΔUS12-BAC and Han-wt-BAC were inoculated onto HELF at the multiplicity of infection of 0.1 pfu/cell. The viral titer in the supernatant was measured by TCID50 assay and growth kinetics of the viruses in HELF was studied. Results Han-ΔUS12-BAC clone was successfully constructed. Han-ΔUS12-BAC was reconstructed in HELF to generate infectious virions. Growth kinetics assay indicated that Han- ΔUS12-BAC and Han-wt-BAC showed no differences in their growth and dissemination in HELF. Conclusion US12 in HCMV clinical strain Han is dispensable for HCMV growth and dissemination in HELF.

Key words: cytomegalovirus, US12, bacterial artificial chromosome, growth kinetics

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  • R373.9
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