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中国医科大学学报 ›› 2017, Vol. 46 ›› Issue (8): 677-680.doi: 10.12007/j.issn.0258-4646.2017.08.002

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乳腺癌 MCF-7 细胞 p21WAF1/CIP1 启动子区雌激素受体 α 的高功能结合位点

邹丹 1,冯秀艳 2,周伟强 2   

  1. 沈阳医学院 1 病理生理学教研室;2 辽宁省环境污染与微生态重点实验室,沈阳 110034
  • 收稿日期:2016-12-16 出版日期:2017-08-30 发布日期:2017-08-24
  • 通讯作者: 周伟强 E-mail:zhouwq@hotmail.com
  • 作者简介:邹丹(1971 -),女,副教授,博士 .
  • 基金资助:
    国家自然科学基金(81172509);辽宁省自然科学基金(201602735);沈阳市科学技术计划(F15?199?1?28)

High-affinity Binding Sites for Estrogen Receptor α in the p21WAF1/CIP1 Promoter Region in Breast Cancer MCF-7 Cells

ZOU Dan1,FENG Xiuyan2,ZHOU Weiqiang2   

  1. 1 Department of Pathophysiology,Shenyang Medical College,Shenyang 110034,China;2 Key Laboratory of Environmental Pollution and Microecology of Liaoning Province,Shenyang Medical College,Shenyang 110034,China
  • Received:2016-12-16 Online:2017-08-30 Published:2017-08-24

摘要: 目的 研究雌激素受体(ER)α 募集于 p21WAF1/CIP1 启动子区调控其转录活性的具体作用位点,明确辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)及瘦素(leptin)在调节 p21WAF1/CIP1 启动子功能中的分子机制。方法 将处于对数生长期的乳腺癌 MCF-7 细胞在无血清 培养基中饥饿 24 h 后,分别用 20 μmol/L 的 SAHA 0.88 μL(SAHA 组)、0.625 nmol/L 的 leptin 10 μL(leptin 组)处理 24 h,对照组在 完全型 RPMI-1640 培养基中培养细胞。应用染色质免疫共沉淀技术将各组细胞裂解液与 ERα 抗体孵育,收集纯化结合 ERα 抗 体的 DNA 片段,应用实时 PCR 法检测 p21WAF1/CIP1 启动子区从转录起始点到其上游(+2~-4 000 bp)f1~f10 片段的 DNA 相对表达量 并用 2-ΔΔCt 法分析。结果 对照组中,与 ERα 抗体结合的 f1、f2、f8 片段 DNA 相对表达量较 f9 片段高出 2 倍以上(P < 0.01)。与对 照 组 比 较 ,SAHA 及 leptin 组 f1~f10 片 段 与 ERα 抗 体 结 合 能 力 均 降 低 ,其 中 SAHA 组 f8 片 段 DNA 相 对 表 达 量 达 最 低 值(P <0.01),且明显低于 leptin 组(P < 0.01)。SAHA 组中以 f8 片段为对照,其他片段与 ERα 抗体结合能力均较其升高(P < 0.05 或0.01)。leptin 组中以 f8 片段为对照,其他片段与 ERα 抗体结合能力均较其降低,除 f1 外均有统计学差异(P < 0.01)。结论 乳 腺癌细胞增殖过程中细胞增殖信号招募 ERα 至 p21WAF1/CIP1 启动子区,且 p21WAF1/CIP1 启动子区-2 800 bp~-3 200 bp 区域存在与 ERα 高度结合的靶功能区。

关键词: 乳腺癌, MCF-7 细胞, p21WAF1/CIP1, 雌激素受体 α, 辛二酰苯胺异羟肟酸, 瘦素

Abstract: Objective To investigate the specific sites that estrogen receptor(ER)α could be recruited to in the p21WAF1/CIP1 promoter region to regulate its transcriptional activity in MCF-7 cells,and to clarify the molecular mechanism of suberoylanilide hydroxamic acid(SAHA)and leptin in the regulation of p21WAF1/CIP1 promoter function. Methods MCF-7 cells were starved by culturing them in fetal calf serum-free medium for 24 hours,and then treated with 20 μmol/L of 0.88 μL SAHA(SAHA group)or 0.625 nmol/L of 10 μL leptin(leptin group)for 24 hours,or cultured in complete RPMI-1640 medium(control group). Cell lysates were incubated with anti-ERα antibody for ChIP analysis. The relative expression levels of DNA fragments,ranging from the TSS to upstream of the p21WAF1/CIP1 promoter region(+2 to -4 000 bp),that bound the antibody were detected by real-time PCR. Results In the control group,the relative expression levels of f1,f2,and f8 DNA fragments that bound the antiERα antibody were two-fold higher than the relative expression of the f9 fragment(P < 0.01). In the SAHA and leptin groups,the relative expression of f1 to f10 DNA fragment that bound anti-ERα antibody was significantly lower than that of the control. The binding affinity of ERα for the f8 fragment was the lowest(P < 0.01)in the SAHA group,and it was significantly lower than that in the leptin group(P < 0.01). Conclusion ERα could be recruited to the p21WAF1/CIP1 promoter via signaling pathways activated during the proliferation of breast cancer MCF- 7 cells. Moreover,the DNA fragment ranging from -2 800 to -3 200 bp upstream of the p21WAF1/CIP1 promoter is the target functional region for high-affinity binding with ERα.

Key words: breast cancer, MCF-7 cell, p21WAF1/CIP1, estrogen receptor α, suberoylanilide hydroxamic acid, leptin

中图分类号: 

  • R977.12
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