中国医科大学学报

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中国医科大学学报 ›› 2009, Vol. 38 ›› Issue (12): 898–.

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BMP-14与bFGF联合诱导骨髓间充质干细胞向软骨分化的实验研究

张云鹏; 白希壮; 孙羽   

  • 出版日期:2010-01-20 发布日期:2010-04-19
  • 通讯作者: 白希壮 E-mail:zpmhh@sina.com

The Experimental Study of BMP-14 and bFGF in Inducing Chondrogenesis of Rat Bone Marrow Stem Cells

  • Online:2010-01-20 Published:2010-04-19

摘要:

目的研究骨形态发生蛋白-14(BMP-14)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)联合诱导大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)向软骨分化的协同作用。方法采用密度梯度离心法与贴壁分离法相结合分离、纯化大鼠骨髓间充质干细胞,用含10%胎牛血清的L-DMEM培养至第3代作为种子细胞,对照组A组不加生长因子,实验组B、C、D组分别加入100ng/ml
      BMP-14、10ng/ml bFGF和100ng/ml BMP-14+10ng/ml
      bFGF,培养24h后各组间行细胞增殖比较,14d后观察各组细胞形态学改变,各组间行Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色和阿尔辛蓝染色。结果培养14d后,A、B、C、D4组的Ⅱ型胶原细胞染色阳性率分别为(7.5210±3.7243)%、(40.8271±1.2787)%、(17.2818±1.4242)%、(60.5114±1.7634)%;阿尔辛蓝染结果为:A组阴性,B、C组呈淡染,D组呈蓝色。结论BMP-14和bFGF的联合应用较单个细胞因子可以明显诱导骨髓间充质干细胞向软骨细胞表型分化及促进细胞增殖。

关键词: 骨髓间充质干细胞, 骨形态发生蛋白-14, 碱性成纤维细胞生长因子, 软骨分化, 骨髓间充质干细胞, BMP-14, bFGF, 软骨分化

Abstract:

Objective To investigate the synergic effect of bone morphogenetic
      protein-14 (BMP-14)and basic fibroblast growth factor (bFGF)in inducing
      chondrogenesis of rat bone marrow stem cells(BMSCs). Methods We used
      density gradient centrifugation plus adhesion separation to isolate and
      purify rat BMSCs. BMSCs were cultured in L-DMEM containing 10% fetal
      bovine serum until the third generation as seed cells. Four study groups
      were set. Group A is negative control group. 100ng/ml BMP-1,10 ng/ml bFGF
      and (100 ng/ml BMP-14+10 ng/ml bFGF)were seperately added to group B,C and
      D. After 24 hours of culture,a comparison was made between four groups for
      cell proliferation. After 14 days of culture,observations were made for
      morphological changes,type-Ⅱ collagen and Alcian blue staining were given
      to every group. Results After 14 days of cell culture,the positive rate of
      type-Ⅱ collagen staining was (7.5210±3.7243)% in group A,(40.8271±1.2787)%
      in group B,(17.2818±1.4242)% in group C,(60.5114±1.7634)% in group D.
      As for alcian blue staining,group A was negative,group B and C were
      slight-stained,and group D was blue. Conclusion The combination of BMP-14
      and bFGF induces proliferation and chondrogenesis more effectively than
      either BMP-14 or bFGF alone.

Key words: bone marrow-derived mesenchymal stem cells, bone morphogenetic protein-14, basic fibroblast growth factor, cartilage differentiation, BMSCs, BMP-14, bFGF, Cartilage differentiation

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