中国医科大学学报

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中国医科大学学报 ›› 2013, Vol. 42 ›› Issue (12): 1072–1078.

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TK1和TIMP1基因共表达载体的构建及其在大鼠血管平滑肌细胞中的表达

余惠珍,向红黄,舒洁,朱鹏立,潘玮,张枫   

  1. 福建医科大学省立临床医学院干部二科福建省立医院老年医学研究室福建省临床老年病研究所
  • 收稿日期:2013-06-18 出版日期:2013-12-30 发布日期:2018-06-28
  • 通讯作者: 朱鹏立 E-mail:zpl7755@126.com
  • 作者简介:余惠珍(1968-),女,副主任医师,博士.
  • 基金资助:
    福建省自然科学基金(2011J01134; 2013J01273)

Construction of TK1 and TIMP1 Genes Mediated by Recombinant Adenovirus Vector and Co-expression in Rat Vascular Smooth Muscle Cells

YU Huiz-hen, XIANG Hong, HUANG Shu-jie,ZHU Peng-li,PAN Wei,ZHANG Feng   

  1. Second Medical Department , Fujian Provincial Hospital, Provincial Clinical College, Fujian Medical University, Fujian Provincial Hospital Key Laboratory of Geriatrics, Fujian Institute of Clinical Geriatrics, Fuzhou 350001, China
  • Received:2013-06-18 Online:2013-12-30 Published:2018-06-28

摘要: 目的构建含人组织激肽释放酶1(hTK1)和基质金属蛋白酶组织抑制物(TIMP1)基因的重组腺病毒载体,并观察其在大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)中的表达。方法选择相对应酶切位点,酶切含人TIMP1基因片段的原始质粒和腺病毒穿梭质粒pDC316,经连接、热激、转化等亚克隆而构建成重组穿梭质粒。之后,应用限制性内切酶BglⅡ/SalⅠ,酶切含启动子和hTIMP1基因片段,再通过回收片段以及连接、热激等步骤亚克隆至pDC316-hTK1载体中,构建含双基因(hTK1和hTIMP1)的重组病毒穿梭质粒。利用AdMax腺病毒Cre/loxP重组酶系统,将该质粒和骨架病毒质粒于293A细胞中同源重组包装产生双基因的重组腺病毒载体。采用Western blot测定在VSMCs中的表达。结果经PCR、双酶切和测序证实,重组病毒穿梭质粒pDC316-hTIMP1-EGFP和pDC316-hTK1-hTIMP1构建正确。在293A细胞里成功包装产生含双基因的重组腺病毒载体Ad5-hTK1-hTIMP1感染VSMCs后,hTK1和hTIMP1蛋白呈独立高表达,表达水平呈浓度依赖性增加。结论首次成功构建并包装了含双基因(hTK1和hTIMP1)的重组腺病毒载体,目的蛋白在VSMCs中呈现独立高表达,为血管重构性疾病的多个功能基因治疗奠定初步实验室基础

关键词: 组织激肽释放酶1基因, 基质金属蛋白酶组织抑制物1基因, 重组腺病毒载体, 血管重构

中图分类号: 

  • R329
[1] 狄正鸿 ,许静 ,侯殿东 ,纪莲 ,刘晓梅 ,孙鲁宁. 小鼠SPINK5 基因重组过表达腺病毒载体构建及其对特应性皮炎小鼠模型皮损疗效的研究[J]. 中国医科大学学报, 2017, 46(1): 11-16.
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